Producción de plásmidos recombinantes para su uso como controles de la técnica RT-PCR para el diagnósticode los virus Chikungunya y Zika

Nathaly Andrea Mayora Hernández, Luis Gerardo Medina Pestana, José Antonio Valor Páez, Vanessa Karina Vera Bellafiore, Jesús David Reyes Osorio, Daría Elena Camacho García

Resumen


El diagnóstico molecular de arbovirus es indispensable para identificar agentes etiológicos, particularmente en zonas endémicas para al menos uno de ellos. Estas deben ser validadas con controles positivos, los cuales están clásicamente representados por virus vivos, cuya obtención puede ser riesgosa, laboriosa y costosa. El objetivo de este estudio fue producir plásmidos recombinantes para su uso como controles positivos en la validación de la técnica RT-PCR para el diagnóstico de los virus Chikungunya (CHIKV) y Zika (ZIKV). A partir de los ARN extraídos de los virus [CHIKV (LARD809-GC) y ZIKV (MR766)] se obtuvieron por RT-PCR fragmentos parciales de ADN correspondientes a secuencias nucleotídicas de los genes E1 y NS5 de los virus Chikungunya y Zika, respectivamente, para serclonados en el plásmido comercial pGEM®-T Easy. La clonación se confirmó mediante PCR de colonias y PCR de ADN plasmídicos extraídos a partir de las colonias recombinantes. Se logró la producción de dos plásmidos recombinantes CHIKV-E1/ pGEM®-T Easy y ZIKV-NS5192/pGEM®-T Easy con cada una de las secuencias especificadas, para su uso en la validación y control de las técnicas moleculares descritas en este reporte, para el diagnóstico de agentes virales CHIKV y ZIKV, evitando la manipulación de cultivos celulares y garantizando una fuente confiable de controles positivos.

Palabras clave


: Chikungunya, Zika, ADN recombinante, Diagnóstico, RT-PCR.

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Referencias


Acevedo A. M., Santana E., Díaz de Arce H., Pérez L.J., Caballero A., Suárez L. & Sánchez O. (2009). Desarrollo de controles positivos para métodos moleculares de detección de virus de influenza

aviar. Rev. Salud Anim 31: 50-54.

Balm M., Lee C., Lee H., Chiu L., Koay E. & Tang J. (2012). A Diagnostic polymerase chain reaction assay for Zika Virus. J. Med. Virol. 84: 1501-1505.

Borgherini G., Poubeau P., Staikowsky F., Lory M., Le Moullec N., Becquart J. P., et al. (2007). Outbreak of chikungunya on Reunion Island: early clinical and laboratory features in 157 adult patients. Clin. Infect. Dis., 44: 1401-1407.

Camacho D., Reyes J., Franco L., Comach G. Ferrer E. (2016). Clonación de secuencias de Alfavirus y Flavivirus para su uso como controles positivos en el diagnóstico molecular. Rev. Peru. Med. Exp. y Salud Publica, 33: 269-273.

Camacho D. E., Ferrer E., Triana-Alonso J. L., Ferreras A. C., Graterol H., Comach G. et al. (2012). Amplificación de la región 5 ́UTR-C del genoma de los cuatro serotipos de Virus Dengue. Salus online. Documento en línea: https://www.redalyc.org/pdf/3759/375939022009.pdf [Consultado: 2020, Julio, 05].

Collao X., Negredo A., Cano J ., Tenorio A., de Ory F., Benito A., et al. (2010). Different Lineages of

Chikungunya Virus in Equatorial Guinea in 2002 and 2006. Am. J. Trop. Med. Hyg., 82: 505-507.

Gubler D. J., Kuno G. & Markoff L. (2007). Flaviviruses. 1153-1252. En: Knipe, DM, Howley, PM, editors. Fields Virology. 5th ed. Lippincott Williams and Wilkins, Philadelphia PA USA.

Guzmán M. G. & Kourí G. (1996). Advances in dengue diagnosis. Clin. Diagn. Lab. Immunol., 3: 621-627.

Fischer M., Staples J. E., Arboviral Diseases Branch, National Center for Emerging and Zoonotic Infectious Diseases, CDC. (2014). Notes from the field: chikungunya virus spreads in the Americas Caribbean and South America, 2013-2014. Morb Mortal Wkly Rep; 63: 500–501.

Krauer F., Riesen M., Reveiz L., Oladapo O. T., Martinez-Vega R., Porgo T. V., et al. (2017). Zika virus infection as a cause of

congenitalbrainabnormalities and Guillain-Barre syndrome: systematicreview. PLoS Med, 14:e1002203.

Lanciotti R. S., Calisher C. H., Gubler D. J., Chang G. J. & Vorn¬dam A. V. (1992). Rapid detection and typing of dengue viruses from clinical samples by using Reverse Transcriptase-Polymerase Chain Reaction. J. Clin. Microbiol., 30: 545–551.

Navarrete-Castro J., Martínez-Rodríguez M., SiriaTorreblanca N. & Calderón-Rodríguez G.M. (2004). Clonación de una secuencia representativa de la región no traducible 5´ (5´-UTR) del virus de

la hepatitis C. Bioquímica. 29: 11-17.

Oehler E., Watrin L., Larre P., Leparc-Goffart I., Lastere S., Valour F., et al. (2014). Zika virus infection complicated by Guillain-Barre syndrome – case report, French Polynesia, December 2013. Euro Surveill. 19: 20720.

Ogden R. C. & Adams D. A. (1987). Electrophoresis in agarose y acrylamide gels. Meth. Enzymol., 152:61-87.

Oletta J. F. (2016). Epidemia de fiebre chikungunya en Venezuela, 2014–2015. Gac Med Caracas, 124: 122-137.

Oliveira Melo A. S., Malinger G., Ximenes R., Szejnfeld P. O., Alves Sampaio S. & Bispo de Filippis A. M. (2016). Zika virus intrauterine

infection causes fetal brain abnormality and microcephaly: Tip of the iceberg? Ultrasound. Obstet Gynecol, 47: 6–7.

OMS (2015). Infección por el virus de ZikaVenezuela. Documento en línea: https://www.who.int/csr/don/03-december-2015-zika-venezuela/es/ [Consultado: 2020, Abril, 05].

OPS (2015). Number of reported cases of chikungunya fever in the Americas, by country or territory 2013-2014 cumulative cases (Updated 23 Oct 2015). Number of Reported Cases of Chikungunya Fever in the Americas 2015; 2016. Documento en línea.

https://www.paho.org/hq/index.php?option=com_topics&view=rdmore&cid=5927&Itemid=40931〈=en [Consultado: 2020, Julio, 24].

OPS/OMS (2020a). Temas. Chikungunya. Documento en línea.https://www.paho.org/data/index.php/es/temas/chikves.html [Consultado: 2020, Julio, 05]

OPS/OMS (2020b). Temas. Zika. Documento en línea.https://www.paho.org/data/index.php/es/temas/indicadores-zika.html [Consultado: 2020,

Julio, 05]

Pimentel R., Skewes-Ramm R. & Moya J. (2014). Chikungunya in the Dominican Republic: lessons learned in the first six months [in Spanish]. Rev. Panam. Salud Publica, 36: 336-341.

Sambrook J, Russel D. (2001). Molecular Cloning: a laboratory manual, 3a ed. Cold Spring Harbor, New York.

Sánchez-Seco M. P., Rosario D., Quiroz E., Guzmán G. & Tenorio A. (2001). A generic nested-RTPCR followed by sequencing for detection and identification of members of the alphavirus genus.

J of V Methods, 95: 153-161.

Strauss J. H. & Strauss E. G. (1994). The alphaviruses:

gene expression, replication and evolution. Microbiol Rev; 58: 491-562

Schwartz O. & Albert M. L. (2010). Biology and pathogenesis of chikungunya virus. Nat Rev Microbiol; 8: 491–500.

Van Genderen F. T., Krishnadath I., Sno R., Grunberg M. G., Zijlmans W. & Adhin M. R. (2016). First Chikungunya Outbreak in Suriname; Clinical and Epidemiological Features. PLoSNegl. Trop. Dis.; 10: e0004625.

WHO (2018). Enfermedad por el virus de Zika. Documento en línea: https://www.who.int/es/news-room/fact-sheets/detail/zika-virus [Consultado: 2020, Julio, 05].


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